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高效液相色谱（HPLC）中混合物是在色谱柱中被分离的，色谱柱内填充有特定的填料，这些填料具有不同的吸附力或亲和力，当混合物中的各组分经过色谱柱时，会与填料发生相互作用，从而实现不同组分的分离，这种分离过程是基于各组分物理化学性质的微小差异，如分子大小、形状、官能团等。
在液相色谱流程中，试样混合物是通过色谱柱内的填料进行分离的，当试样混合物进入色谱柱后，各组分在流动相和固定相之间不断分配，由于各组分与固定相之间的作用强度不同，因此它们随流动相的移动速度也不同，从而实现分离，这个过程涉及多种复杂的物理化学作用，包括吸附、溶解、扩散等。
高效液相色谱中的混合物分离主要发生在色谱柱内，通过特定的填料与混合物中的各组分之间的相互作用来实现分离，这个过程涉及多种复杂的物理化学作用，需要特定的操作条件和优化参数以获得最佳的分离效果。
